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測(cè)定ABA含量,采用ELISA方法的的過(guò)程

點(diǎn)擊次數(shù):13409   發(fā)布時(shí)間:2014/4/3 11:06:25

     ELISA法的實(shí)驗(yàn)越來(lái)越廣泛的應(yīng)用,而現(xiàn)代的實(shí)驗(yàn)技術(shù)也在不同的發(fā)展,我公司每周都會(huì)有實(shí)驗(yàn)知識(shí)的,下面我們來(lái)看看測(cè)定ABA含量,采用ELISA方法的的過(guò)程。

1、包被:在微量滴定板內(nèi)準(zhǔn)確加入100μLABA包被液,37℃濕盒過(guò)一個(gè)晚上。
2、稀釋?zhuān)喝?支試管每管加150μLDB,管中加入50μL(2000ng/50μL)標(biāo)準(zhǔn)液,充分渦旋后,取50μL至第二號(hào)管中,同樣渦旋后,取50μL到第三管;依次稀釋到第六管,稀釋后的標(biāo)準(zhǔn)ABA依次為1000ng、500ng、250ng、125ng、62.5ng、31.25ng、15.625ng、7.8125ng/50μL。
3、洗板:從37℃濕盒中取出滴定板,恢復(fù)到室溫后,棄去包被液,用WB(洗滌緩沖液)洗滌三次,甩干(吸水紙)。
4、加樣:1~8孔對(duì)應(yīng)加入ABA標(biāo)樣50μL,10號(hào)孔相應(yīng)加入*濃ABA標(biāo)樣,9號(hào)孔加50μLDB,三排重復(fù);然后每孔加50μL抗體,37℃ 45分鐘。
5、洗板 
6、加酶標(biāo)二抗:每孔加100μL,37℃反應(yīng)1小時(shí)。
7、洗板
8、顯色:各孔加10μLOPD顯色液,37℃ 20分鐘。
9、終止反應(yīng):各孔加50μL 6NH2SO4。
10、讀數(shù):490nm讀取OD值。其中10號(hào)孔調(diào)零,而9號(hào)孔為值(B0),1~8號(hào)孔的OD值為B。
11、結(jié)果計(jì)算:以In(B/B0)∕(1-B/B0)為縱坐標(biāo),以標(biāo)準(zhǔn)ABA濃度的常用對(duì)數(shù)(lg[ABA])為橫坐標(biāo),繪制曲線(xiàn)。
    這個(gè)方法是一種固相抗原型酶聯(lián)免疫法,先將ABA蛋白質(zhì)復(fù)合物與固相載體結(jié)合,然后將待測(cè)的ABA和兔抗ABA抗體加入微量滴定板的孔中,進(jìn)行競(jìng)爭(zhēng)反應(yīng),接著棄去上清液,洗滌固相表面,加入酶標(biāo)二抗使其與結(jié)合在固相ABA上的抗體反應(yīng),*后去除多余的未反應(yīng)的酶標(biāo)二抗,測(cè)定與固相結(jié)合的酶活性,酶活性和待測(cè)ABA含量呈負(fù)函數(shù)關(guān)系,即固相ABA結(jié)合的抗體與酶標(biāo)二抗量(OD或B%)隨待測(cè)ABA含量增加而減少,以一系列已知濃度的ABA的OD值制圖而獲得標(biāo)準(zhǔn)競(jìng)爭(zhēng)性抑制曲線(xiàn),對(duì)于未知樣品B,只要在同樣條件下測(cè)定反應(yīng)后的OD值,就可以從標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)上查到ABA的量。
    我公司主代理elisa試劑盒,各種種屬都有,了解、訂購(gòu)可來(lái)電給我公司葉經(jīng)理,近期清明七折優(yōu)惠的。

原創(chuàng)作者:上海恒遠(yuǎn)生物科技有限公司

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