大鼠血管性血友病因子裂解蛋白酶試劑盒詳細(xì)說明書

【注意事項】

1. 從-20℃取出的試劑盒，在4℃解凍過夜。盒內(nèi)每一瓶解凍的溶液在開啟瓶蓋之前都要輕輕搖勻，避免解凍時出現(xiàn)的分層，否則會出現(xiàn)濃度不均一的現(xiàn)象。

2. 開啟試劑盒之前要室溫平衡至少30分鐘。

3. 配制各種試劑時，切記混勻！

4. 用戶在初次使用試劑盒時，應(yīng)將各種試劑管離心數(shù)分鐘，以便試劑集中到管底。

5. 建議所有豬IL-1β標(biāo)準(zhǔn)品、樣本都做雙份檢測。

6. 要嚴(yán)格避免操作過程中酶標(biāo)板干燥。干燥會使酶標(biāo)板上生物成份迅速失活！

7. 為免交叉污染，要避免重復(fù)使用手中的吸頭和試管。

【洗板方法】

手工洗板方法：吸去（不可觸及板壁）或甩掉酶標(biāo)板內(nèi)的液體；在實驗臺上鋪墊幾層吸水紙，酶標(biāo)板朝下用力拍幾次；將推薦的PBS或TBS洗滌緩沖液至少0.35ml注入孔內(nèi)，浸泡1-2分鐘。根據(jù)需要，重復(fù)此過程數(shù)次。

自動洗板：如果有自動洗板機(jī)，應(yīng)在熟練使用后再用到正式實驗過程中。

【樣品的準(zhǔn)備和保存】

樣品如果不立即分析，應(yīng)分裝后冷凍保存，且避免反復(fù)凍融。

血清——用干凈試管收集血液，室溫凝固2小時或4℃過夜，離心1000×g 10分鐘，收集血清。立即分析或分裝后-20℃冷凍保存。

細(xì)胞培養(yǎng)、組織勻漿、體液——離心去除沉淀，立即分析或分裝后-20℃冷凍保存。

【樣品稀釋的一般原則】

用戶須查閱文獻(xiàn)了解標(biāo)本內(nèi)待測因子的含量，決定適當(dāng)?shù)南♂尡稊?shù)，以使稀釋后樣品中待測因子的濃度處于ELISA試劑盒的*佳檢測范圍。樣品的稀釋應(yīng)有詳細(xì)記錄。

【試劑準(zhǔn)備和保存】

A. 豬IL-1β標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋和使用：在使用前2小時內(nèi)準(zhǔn)備。將凍干品管內(nèi)加入1ml樣品稀釋液，徹底溶解后做倍比稀釋。

稀釋后的豬IL-1β標(biāo)準(zhǔn)品在2小時內(nèi)使用。

B．生物素標(biāo)記豬IL-1β抗體工作液：在使用前2小時內(nèi)準(zhǔn)備。

1． 根據(jù)每孔需要0.1ml計算總的用量（實際配制時應(yīng)多配制0.1-0.2ml）。

2． 按10ul生物素標(biāo)記豬IL-1β抗體加豬IL-1β抗體稀釋液990ul的比例配制工作液。輕輕混勻。

C．親和素-過氧化物酶復(fù)合物（ABC）工作液的準(zhǔn)備：在使用前1小時內(nèi)準(zhǔn)備。

1． 根據(jù)每孔需要0.1ml計算總的用量（實配時應(yīng)多配制0.1-0.2ml）。

2． 按10ul親和素-過氧化物酶復(fù)合物（ABC）加ABC稀釋液990ul的比例配制工作液。輕輕混勻。

D. TMB顯色工作液的準(zhǔn)備：在使用之前30分鐘，按TMB顯色液A 9份加 TMB顯色液B 1份的比例配制TMB顯色工作液。

【大鼠血管性血友病因子裂解蛋白酶試劑盒操作程序】

1． 確定本次檢測所需的已包被豬IL-1β抗體的酶標(biāo)板孔數(shù)目。

2． 將倍比稀釋的豬IL-1β標(biāo)準(zhǔn)品各0.1ml依次加入一排7孔中，1孔只加樣品稀釋液的作為對照。處理后的標(biāo)本按100ul每孔加入。

3． 酶標(biāo)板加上蓋，37℃反應(yīng)90分鐘。

4． 反應(yīng)后用自動洗板機(jī)吸去酶標(biāo)板內(nèi)的液體；或甩去酶標(biāo)板內(nèi)液體，再對著吸水紙拍幾下。洗滌2次。

5． 將準(zhǔn)備好的生物素豬IL-1β抗體工作液按每孔0.1ml依次加入。37℃反應(yīng)60分鐘。

6． 0.01M TBS或0.01M PBS洗滌3次，每次浸泡1分鐘左右。

7． 將準(zhǔn)備好的ABC工作液按每孔0.1ml依次加入。37℃反應(yīng)30分鐘。

8． 0.01M TBS或0.01M PBS洗滌5次，每次浸泡1-2分鐘左右。

9． 按每孔0.1ml依次加入TMB顯色工作液，37℃避光反應(yīng)，反應(yīng)過程中，要經(jīng)常的觀察，當(dāng)肉眼可見豬IL-1β標(biāo)準(zhǔn)品的前3-4孔有明顯的梯度藍(lán)色，后3-4孔差別不明顯時，即可加入TMB終止液0.1ml/孔。（顯色反應(yīng)*長不要超過30分鐘）。

10． 用酶標(biāo)儀在450nm測定O.D.值。

11． 根據(jù)樣品的吸光值在坐標(biāo)上找出對應(yīng)的濃度。用戶也可以使用各種應(yīng)用軟件來計算。應(yīng)記住由于樣品稀釋了N倍，其實際濃度應(yīng)該×N。

【操作程序總結(jié)】：

準(zhǔn)備試劑，樣品和豬IL-1β標(biāo)準(zhǔn)品

加入準(zhǔn)備好的樣品和豬IL-1β標(biāo)準(zhǔn)品，37℃反應(yīng)90分鐘

洗板2次，加入生物素化豬IL-1β抗體工作液，37℃反應(yīng)60分鐘

洗板3次，加入ABC工作液，37℃反應(yīng)30分鐘

洗板5次，加入TMB顯色液，37℃反應(yīng)

加入TMB終止液

30分鐘之內(nèi)讀OD值

計算標(biāo)本待測因子含量

【檢測范圍】：1000pg/ml→15.6pg/ml。

【敏感性】： ＜5pg/ml

【特異性】： 系統(tǒng)和其它細(xì)胞因子無交叉反應(yīng)。

【保存】： -20℃ [短期內(nèi)（如兩周）可4℃]

【有效期】： 12個月（-20℃）。

【大鼠血管性血友病因子裂解蛋白酶試劑盒用途】： 用于體外定量分析液體標(biāo)本（通用型）。

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更新時間：2024/10/8 9:18:38